ABSTRACT
Apoptosis deregulation might have a role in the pathophysiology of polycythemia vera (PV). This study evaluated Bcl-2 molecule expression in CD34+ cells and leukocytes in 12 PV patients. Gene expression was investigated by real time PCR using SybrGreen Quantitect kit and protein expression was evaluated by western-blotting. JAK2 V617F mutation was detected according to Baxter et al (2005). CD34+ cells from PV patients presented higher levels of A1 and Mcl-1 expression (median: 22.6 and 5.2, respectively) in comparison with controls (0.9 and 0.5, p=0.004 and p=0.020); while Bcl-2 and Bcl-xL expression decreased in PV patients (0.18 and 1.19) compared with controls (1.39 and 2.01, p=0.006 and p=0.020). CD34+ cells in PV patients showed an elevated Bid expression (14.4) in comparison with healthy subjects (1.0; p=0.002). Patients' leukocytes showed an A1 augmentation (7.41, p=0.001) and a reduced expression of Bax (0.19; p=0.040) and Bad (0.2; p=0.030). There was no correlation between JAK2 V617F allele burden and molecular expression. PV patients showed alterations in Bcl-2 members' expression, which may interfere with control of apoptotic machinery and contribute to disease pathogenesis.
A desregulação da apoptose parece participar da fisiopatologia da policitemia vera (PV). Este estudo avaliou a expressão das moléculas da família Bcl-2 em células hematopoéticas CD34 + e leucócitos de 12 pacientes com PV. Foram realizados: a quantificação da expressão gênica por PCR em tempo real utilizando kit Sybrgreen Quantitect, avaliação da expressão de proteínas por western-blot e detecção da mutação JAK2 V617F segundo Baxter et al. (2005). Células CD34 + dos pacientes com PV apresentaram maior expressão de A1 e Mcl-1 (mediana: 22,6 e 5,2, respectivamente) em comparação com controles (0,9 e 0,5, p = 0,004 e p = 0,020) e expressão de Bcl-2 e Bcl-xL diminuída nestes pacientes (0,18 e 1,19) em relação aos controles (1,39 e 2,01, p = 0,006 e p = 0,020). Células CD34 + dos pacientes com PV mostraram expressão elevada de bid (14,4) em comparação aos controles (1,0; p = 0,002). Leucócitos dos pacientes mostraram aumento de A1 (7,41, p = 0,001) e expressão reduzida do Bax (0,19; p = 0,04) e Bad (0,2; p = 0,030). Não houve correlação entre percentagem de alelos JAK2 V617F mutados e expressão molecular. Pacientes com PV apresentaram alterações na expressão de moléculas Bcl-2 que podem interferir no controle da apoptose e contribuir para a patogênese da doença.
Subject(s)
Humans , Polycythemia Vera/classification , Apoptosis/physiology , Genes, bcl-2 , MutationABSTRACT
A screening aimed to find new galactose oxidase producer isolates and to evaluate the production among Fusarium graminearum strains was conducted. Thirty-five isolates out of 39 analysed produced the enzyme at several levels. The data indicated a wide distribution of galactose oxidase within F. graminearum and also revealed new producer isolates. The enzyme produced by different isolates showed similar thermal activity and stability and were active on same substrates. However, the optimum pH ranged from 7.0 to 7.5. Thus, all evaluated isolates were suitable for the production of galactose oxidase.
Uma análise visando encontrar novos isolados produtores de galactose oxidase (GO) e avaliar a distribuição da produção entre cepas de Fusarium graminearum foi conduzida. Trinta e cinco isolados de 39 testados produziram a enzima em diferentes níveis. Os dados indicaram uma ampla distribuição da produção da galactose oxidase por F. graminearum e revelaram novos isolados produtores. A enzima produzida por diferentes isolados apresentou atividade e estabilidade térmicas similares e foi ativa sobre os mesmos substratos. No entanto, o pH ótimo variou de 7,0 a 7,5. Assim, todos os isolados são adequados para a produção de galactose oxidase.